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El nombre de Dos Hermanas se explica, según la leyenda popular, por dos hermanas, Elvira y Estefanía Nazareno, a las que se considera las fundadoras de la población. Tras la conquista de Sevilla por Fernando III de Castilla, esas tierras se otorgaron al adalid leonés Gonzalo Nazareno, pariente de las dos hermanas, que según la tradición descubrieron en una cueva una escultura gótica de Santa Ana y una campana, que aún se conservan.
De esa tradición procede también el gentilicio de sus habitantes, «nazareno», a partir del apellido de las dos mujeres. Es una explicación legendaria, no documentada históricamente.
La primera mención documentada del nombre Dos Hermanas es de 1405.
Desde la Antigüedad han existido asentamientos humanos en el término municipal, como Orippo, una ciudad romana situada en la Vía Augusta, de Roma a Cádiz, probablemente poblada ya antes por turdetanos. De ella se conservan la Torre de los Herberos y diversos restos, entre ellos varios hornos de alfar.